### 1. 原理及用途

伏马毒素（Fumonisins）是一种由串珠镰刀菌产生的真菌毒素，迄今已知有28种衍生物，其中伏马毒素B1（FB1）是最常见且研究最深入的品种。FB1主要污染玉米及其制品，包括动物饲料。这种毒素对多种动物具有显著毒性，可引发严重的健康问题，比如马的白脑软化症和猪的肺水肿综合症。此外，FB1还有可能诱发人类的食道癌、肝癌与胃癌等疾病，严重影响畜牧业及人类健康。

本试剂盒由预包被偶联抗原的酶标板、辣根酶标记物、抗体、标准品及其他相关配套试剂组成。在检测过程中，标准品或样本溶液与酶标板上的偶联抗原竞争抗伏马毒素B1的抗体。随后加入酶标记物，利用TMB底物显色，样本的吸光度值与其所含伏马毒素B1含量呈负相关，通过与标准曲线比较并乘以样本的稀释倍数，便可计算出样本中伏马毒素B1的残留量。

### 2. 技术指标

1. **灵敏度**：1 ppb (ng/ml) 2. **反应模式**：25℃，反应时间为30分钟至15分钟 3. **检测下限**：玉米、饲料……150 ppb 4. **交叉反应率**：伏马毒素B1……100% 5. **样本回收率**：饲料……95±15%；玉米……100±15%

### 3. 试剂盒组成

试剂盒包括： - 酶标板（96孔） - 标准液（黑盖）：各1 ml，包括0 ppb、1 ppb、3 ppb、9 ppb、27 ppb、81 ppb - 酶标记物（红盖）：55 ml - 抗体工作液（蓝盖）：55 ml - 底物液A（白盖）：6 ml - 底物液B（黑盖）：6 ml - 终止液（黄盖）：6 ml - 10×浓缩复溶液（黄盖）：50 ml - 20×浓缩洗涤液（白盖）：40 ml - 使用说明书：1份 - 盖板膜：1张 - 自封袋：1个

### 4. 需要的器材和试剂

1. **仪器**：酶标仪、打印机、均质器、振荡器、离心机、刻度移液管、天平（感量0.01 g） 2. **微量移液器**：单道20 µl-200 µl，100 µl-1000 µl；多道300 µl

### 5. 样本前处理

1. **样本处理前须知**：实验器具须保持清洁，并使用一次性吸头，以避免污染干扰实验结果。 2. **配液**： - 配液1：将10×浓缩复溶液用去离子水稀释10倍（1份10×浓缩复溶液加9份去离子水），可在4℃保存一个月。 - 配液2：将浓缩洗涤液稀释20倍（1份洗涤液加19份去离子水）。 3. **样本前处理步骤**： - 处理玉米、饲料时，取1 g样本于50 ml离心管，加入5 ml去离子水，振荡5分钟，室温4000转/分离心10分钟。 - 取上清0.1 ml，加入0.9 ml复溶液，混匀，再取50 µl进行分析。 - 样本稀释倍数：50，检测下限：150 ppb。若样本中伏马毒素B1含量较高，可以适量增大稀释倍数。

### 6. 酶联免疫试验步骤

将所需试剂从4℃取出，置于室温下平衡30分钟。注意洗涤液若在冷藏时结晶，需恢复至室温以确保溶解。 1. **编号**：为样本和标准品的微孔按序编号，并记录其位置。 2. **加样反应**：在每个微孔中加入50 µl标准品或样本，接着加入50 µl酶标记物及50 µl抗体工作液，轻轻混匀，25℃反应30分钟。 3. **洗涤**：小心揭开盖板膜，将孔内液体甩干，用350 µl工作洗涤液洗涤5次，每次间隔30秒，拍干孔内残留液体。 4. **显色**：每孔加入50 µl底物液A与50 µl底物液B，轻轻混匀，25℃避光显色15分钟。 5. **终止**：每孔添加50 µl终止液，轻轻振荡混匀。 6. **测吸光值**：用酶标仪在450 nm处测定吸光度值，建议使用双波长450/630 nm。

### 7. 结果分析

1. **百分吸光率的计算**：样本的百分吸光率等于其平均值除以第一个标准液的吸光度值，乘以100%。公式为： 百分吸光度值（%）＝ (A / A0) × 100% 其中，A为样本的平均吸光度值，A0为0 ppb标准液的平均吸光度值。 2. **标准曲线的绘制与计算**：以标准液的百分吸光率为纵坐标，对应浓度的对数为横坐标，绘制半对数曲线。将样本的百分吸光率代入曲线中，从中读取样本浓度。

### 8. 注意事项

1. 室温低于25℃或试剂及样本未回到室温，会导致标准OD值偏低。 2. 洗板时如孔干燥，会影响标准曲线的线性和重复性，应尽快进行后续操作。 3. 确保混合均匀，洗板彻底是一致性分析的关键。 4. 孵育过程中需盖住微孔板，避免光照。 5. 请勿使用已过期试剂盒，并避免不同批次试剂的混用。 6. 显色液如有颜色变化，应立即弃之；若标准吸光度值小于0.5，可能表明试剂变质。 7. 反应终止液具腐蚀性，请避免接触皮肤。

### 9. 贮藏及保存期

储藏条件：试剂盒应在2-8℃保存，避免冷冻。保质期：该产品有效期为1年，生产日期见包装盒。

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